Glossário

Alelos

Diferentes variantes (configurações) de um gene. Os diferentes valores surgem através de um número diferente de unidades de repetição (repetições curtas em tandem).

Cromossoma

Partícula semelhante a um fio que contém a informação genética. Os seres humanos têm 2x 23 cromossomas em todas as células do corpo, exceto nas células germinativas. Representação esquemática dos cromossomas em banda:

ADN

O ácido desoxirribonucleico (ADN) é constituído por moléculas de açúcar, bases e fósforo.
O ADN está presente no núcleo da célula numa hélice de cadeia dupla e contém a informação genética do ser humano. No plasma celular existe também um ADN circular herdado da mãe, o ADN mitocondrial.

dNTPs

DesoxinucleósidoTrifosfatos = blocos de construção dos Nucleótidos do ADN: adenina, timina, citosina, guanina

Gene

Seção de ADN que transporta a informação para a formação da proteína (exão), mas que também contém sequências não codificantes, como promotores, terminadores, intrões, etc.

Um gene existe em duas cópias, herdadas paternalmente e maternalmente (alelos). Possuímos cerca de 2×3 bilhões de pares de bases de ADN, dos quais apenas cerca de 2% são codificadores de proteínas, ou seja, cerca de 25.000 genes. Os restantes cerca de 98% desempenham um papel regulador ou têm funções ainda inexploradas. Contêm também sequências repetitivas, por exemplo, microssatélites.

Genoma

Todo o material genético de um organismo, que é o ADN no núcleo da célula e o ADN mitocondrial no citoplasma.

Microssatélites

Sequências repetidas que consistem em 2 a 6 nucleótido e podem ocorrer 10 a 100 vezes repetidamente. Os microssatélites são a forma mais comum de ADN repetitivo.
Ver: repetições curtas em tandem.

PCR

A reação em cadeia da polimerase é um método para amplificar e marcar sequências de ADN: utilizando iniciadores específicos que se ligam às sequências flanqueadoras dos respectivos marcadores. Vários pares de iniciadores numa configuração de PCR possibilitam a amplificação simultânea de diferentes fragmentos (PCR multiplex).

Uma vez que normalmente utilizamos 19 marcadores STR para a análise de paternidade, são utilizados 38 iniciadores em simultâneo para co-amplificar o ADN. A reação decorre em cerca de 30 ciclos, resultando em milhões de cópias dos segmentos de ADN. Assim, uma concentração inicial baixa de ADN pode ser tecnicamente aumentada.

• Etapa 1: Desnaturação do ADN de cadeia dupla a 94°C.
• Etapa 2: Ligação específica dos iniciadores ao ADN complementar de cadeia simples a 60 °C (recozimento).
• Etapa 3: alongamento dos primers pela Taq DNA polimerase resistente ao calor a 70°C (alongamento da cadeia = alongamento).

Primer

Sequência de ADN constituída por algumas bases (=oligonucleotídeo) que se liga ao local do genoma relevante para a investigação. Neste local, a enzima ADN polimerase liga-se e sintetiza a cadeia de ADN complementar.

STRs – Repetições curtas em tandem

As repetições curtas em tandem são unidades de repetição de 3 a 7 pares de bases no ADN – os chamados microssatélites, pertencem aos polimorfismos, ou seja, é aqui que as pessoas diferem umas das outras e ocorre a variabilidade. O seu padrão é individual e é herdado metade da mãe e metade do pai.
Cada indivíduo é inequivocamente caracterizado pelo seu genoma. Não existem dois indivíduos (exceto gémeos idênticos) com informação genética idêntica.

Os STRs ocorrem em grande número em todos os organismos estudados até à data e estão distribuídos por todo o genoma. A sua grande variabilidade faz dos STR um dos sistemas de marcadores mais utilizados. São polimórficos, ou seja, normalmente podem ser detectados vários alelos numa população para um determinado locus genético. Os marcadores microssatélites são excelentes para investigar relações de parentesco e são atualmente considerados o sistema de marcadores selecionáveis para muitas questões genéticas, não só para verificação de parentesco, mas também em medicina forense, mapeamento do genoma e estudos filogenéticos. Determinamos se duas amostras de ADN provêm da mesma pessoa, de pessoas aparentadas ou não aparentadas, comparando estes padrões STR em pelo menos 16 loci independentes em cromossomas diferentes.

A análise dos cromossomas sexuais X e Y é essencial para provar a relação de parentesco se uma ou mais pessoas testadas estiverem ausentes (insuficiência). Cada homem herdou o seu cromossoma Y exclusivamente do seu pai e, por sua vez, transmite-o ao seu filho. Os descendentes masculinos de um antepassado masculino são todos portadores do mesmo padrão cromossómico Y. Utilizamos pelo menos 23 marcadores STR do cromossoma Y para comparar estes padrões entre indivíduos do sexo masculino.

As filhas têm dois cromossomas X, um herdado do pai e outro da mãe. Duas irmãs devem coincidir em todos os marcadores ligados ao X em pelo menos uma característica, se forem descendentes do mesmo pai. No nosso laboratório, são utilizados pelo menos 12 marcadores ligados ao X para as análises STR cromossómicas ligadas ao X.

Taq polimerase

Uma enzima resistente ao calor que foi isolada pela primeira vez da bactéria Thermophilus aquaticus de géisers e é termoestável. Estende cadeias de ADN numa mistura de reação (reação em cadeia da polimerase, ver PCR).